[摘要] 目的：探討脂肪乳注射液乳粒質(zhì)量研究的方法。基于單粒子光學(xué)傳感技術(shù)的光阻法(LO／SPOS)與電阻法，對脂肪乳注射液的大乳粒進行考察。結(jié)果：LO／SPOS測定大粒子(>5斗m)的結(jié)果小于電阻法(傳統(tǒng)計數(shù)器)。結(jié)論：LO／SPOS與電阻法(傳統(tǒng)計數(shù)器)可測定大粒子(>5斗m)，光阻法具有更為明顯的優(yōu)勢。

[關(guān)鍵詞] 中國藥典；USP；脂肪乳注射液；大乳粒；光阻法；電阻法；比較乳粒、大乳粒測定原理、大乳粒檢測儀、大乳粒分析儀、大乳粒檢測、大乳粒滅菌后超標是什么原因、PFAT5、PFAT5檢測、PFAT5什么意思、大乳粒藥典、靜脈注射脂肪乳粒要求、脂肪乳大乳粒檢測原理、大乳粒檢測方法及各國藥典的規(guī)定、乳劑中大乳粒PFAT5檢測專題、大乳粒檢測方法專題、大乳粒測定。

引言

      我國脂肪乳注射液現(xiàn)行標準為《中華人民共和國衛(wèi)生部標準》1998年版2部第6冊(生化藥品第1分冊)(簡稱部頒標準)和企業(yè)注冊標準(國家食品藥品監(jiān)督管理局標準YBH13472008)。USP35版收載了脂肪乳注射液(lipid injectable emulsion)，是對所有乳劑的一個通用規(guī)定。在“乳粒”檢查項下，企業(yè)注冊標準與部頒標準一致，2者與USP35標準相比，差別較為明顯，尤其是在控制大粒子方面，測定方法和限度都有明顯差異。國內(nèi)現(xiàn)行標準采用計數(shù)器方法，分別對大于1μm和5μm顆粒進行控制；而USP35則采用光阻法對大于5μm顆粒的體積百分比含量進行控制。

1. 測試原理與結(jié)果

      本文決定分別采用PSS-NICOMP AccuSizer 780APS（LO/SPOS單顆粒光學(xué)傳感技術(shù)光阻法）和改進調(diào)整后的COULTER Multisizer3（電阻法）測定大于5μm粒子的體積百分比含量，對光阻法和電阻法測定結(jié)果進行比較。PSS-NICOMP AccuSizer 780APS的測定原理為單顆粒光學(xué)傳感技術(shù)光阻法，傳感器中內(nèi)置了激光光源、flu-cell檢測區(qū)域、探測器等單元，激光照射flu-cell檢測區(qū)域，當粒子經(jīng)過時對激光產(chǎn)生了遮蔽效應(yīng)，探測器接收到一個脈沖信號。脈沖信號的數(shù)量與粒子數(shù)目相關(guān)，脈沖信號的大小與粒子大小相關(guān)。因此可以通過脈沖數(shù)量和脈沖大小計算得出粒子的粒徑分布與數(shù)目。          USP35即采用的該方法。該法優(yōu)點是分辨率高、測量速度快、重復(fù)性好。COULTER Multisizer3數(shù)器測定原理為電阻法。當一個顆粒穿過小孔時，在感應(yīng)區(qū)中一個類似體積的電解液被該顆粒所置換。小孔所產(chǎn)生的通過電解液的電流流動的阻力就改變了，這種阻力上的改變以一個脈沖的形式測量。計數(shù)的脈沖數(shù)量與穿過小孔的顆粒的實際數(shù)量直接相關(guān)。因此可以通過脈沖數(shù)量計算通過小孔的粒子數(shù)。英國藥典丙泊酚脂肪乳注射液項下采用該方法。該法優(yōu)點是分辨率高測量速度快，重復(fù)性好；缺點是容易發(fā)生堵孔故障，需要根據(jù)測定粒子的大小更換小孔管等。

    光阻法與電阻法測定結(jié)果：結(jié)果顯示，電阻法測定結(jié)果比光阻法測定結(jié)果較大，見表1。

       Table 1 光阻法與電阻法測定結(jié)果

2. 討論

      由于對標準理解的差異，企業(yè)采用不同的儀器，導(dǎo)致了測定結(jié)果的差異。

      現(xiàn)行國內(nèi)質(zhì)量標準是0.5μm粒徑描述較為籠統(tǒng)，沒有限度規(guī)定和要求，而大于5μm粒子則采用計數(shù)器檢測法。USP35版收載的脂肪乳注射液采用動態(tài)光散射法或經(jīng)典光散射法測定平均粒徑及粒徑分布(平均粒徑不得過0.5μm)，采用基于單粒子光學(xué)傳感的光阻法(LO／SPOS)( 大于5μm乳粒不得過0.05％)。相比之下，USP35對脂肪乳注射液中乳粒的規(guī)定要更加明確和清晰，不至于引起混淆。但是目前基于單粒子光學(xué)傳感光阻法(LO／SPOS)的設(shè)備僅有美國PSS公司的NICOMP AccuSizer 780APS。

Figure 1 AccuSizer780APS

      乳粒平均粒徑分布和粒度大小與有效性和安全性有直接關(guān)聯(lián)，一般來說，乳劑的粒徑保持在0.2—0.5μm可以保持物理穩(wěn)定性，且容易為人體吸收。而人肺部的毛細血管在4μm~9μm之間，若脂肪乳含有大于5μm的粒子，或者粒子不夠穩(wěn)定，在放置過程中有可能合并成為大于5μm的粒子，就會在肺部發(fā)生栓塞。另有研究表明，大粒子對肝臟產(chǎn)生損傷。因此脂肪乳注射液質(zhì)量控制關(guān)鍵要控制平均粒徑(小于0.5μm) 

和大于5μm粒子的比例。

3. 結(jié)論

      本次研究結(jié)果表明，USP35在乳粒測定方面描述清晰，針對性強，且有相應(yīng)附錄專門對乳粒粒度和粒徑的方法和技術(shù)進行闡述。在新的USP39版，與USP35版描述基本一致。相比之下，國內(nèi)現(xiàn)行質(zhì)量標準在乳粒控制方面一直沒有根本提升，描述和規(guī)定均較為模糊，易引起歧義導(dǎo)致采用不同設(shè)備檢測而產(chǎn)生不同的測定結(jié)果；中國藥典2015年版，收錄的方法和技術(shù)尚未做出修訂。這導(dǎo)致國內(nèi)脂肪乳注射液乳粒質(zhì)量控制水平與國外存在較大差距。有必要對乳粒測定相關(guān)技術(shù)及方法進行增修訂，達到對其質(zhì)量進行監(jiān)督和評價的目的。

      基于單粒子光傳感技術(shù)的光阻法(LO／SPOP)測定大粒子具有明顯的優(yōu)勢，通過光學(xué)設(shè)備對不透光的粒子進行測定，可直接測定樣品，結(jié)果較為直接和直觀；而電阻法需要添加電解質(zhì)，通過顆粒帶電荷的多少來判斷，并通過折算，因此相對來說較為復(fù)雜，而且電解質(zhì)可能會使乳粒聚集，測得的結(jié)果可能比光阻法高，從而影響判斷。乳粒的大小與粒徑分布決定了脂肪乳注射液的物理穩(wěn)定性、臨床安全性和有效性，是一項重要的質(zhì)控指標．通過本研究結(jié)果的探討希望能引起相關(guān)質(zhì)量標準制定和監(jiān)管部門的重視，增修訂相關(guān)質(zhì)量標準，完善藥典附錄，以真正能達到評價產(chǎn)品質(zhì)量的目的，并能促進相應(yīng)的生產(chǎn)和工藝改進，提高該類產(chǎn)品的質(zhì)量水平。